李学敏，张福娥，田若涛，张颖，李淑琴，边林秀
（山西省疾病预防控制中心，山西太原030012）
（转载自《中国消毒学杂志》2017年8月第八期）
摘要：目的研究二氧化氯消毒剂杀菌效果及其毒性，为实际消毒应用提供参考。方法采用悬液定量杀菌试验和动物实验方法，对某二氧化氯消毒剂消毒杀菌效果及毒性进行观察：结果以浓度为100mg/L二氧化氯水溶液对悬液内大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别作用7.5min，杀灭对数值均>5.00；对白色念珠菌作用7.5min，杀灭对数值>4.00。以浓度为300mg/L二氧化氯水溶液气溶胶对室内空气自然菌作用120min，平均消亡率为93.170/0。二氧化氯消毒剂对小鼠急性经口毒性LD，。为3690mg/(kg．bw)；对小鼠急性吸入毒性LCso均大于10000mg/m3。结论该二氧化氯消毒剂对细菌繁殖体和真菌有很好的杀灭效果。吸人性毒性属实际级物质。
关键词二氧化氯；空气消毒；杀菌效果；毒性
中图分类号：R187.2文献标识码：A
文章编号：1001 - 7658( 2017) 08 - 0739 - 03 DOI:10. 11726/j．issn．1001 - 7658. 2017. 08. 011
Study on disinfection related performance of a chlorine dioxide disinfectant
// Xue - min.,ZHANG Fu - e, TIAN Ruo - tao ,ZHANG Ying,LI Shu - qin , BIAN //n. - xiu
( Shanxi Provincial Center for DiSease Prevention and Control,Taiyuan Shanxi 030012,China)
Abstract Objective 'ro study the bactericidal effect and toxic.ity of a chlorine dioxide disinfectant,and provide reference for real application. Methods Suspension germicidal test and animal experiment method were used to observe the disinfecting effect and toxicily of a chlorine dioxide disinfectant. Results The killing logrithm value of' Escherichia coli and Staphylococcus aureu.s "-as both above 5.00 by 100 m~L chlorine dioxide with c:ontact time of 7.5 min and the killing logiithm value of Candida aLbi-cans was above 4. 00 d by 100 mg/L chlorine dioxide with a contac,t time of 7.5 min. The average mortality rate was 93. 17070 when the air natural bacteria indoor was disinfected by chlorine dioxide 300 mL for 120 min. The val_ue of LDjo was 3 690mg/( kg. bw) and respiratory inhalation LCso was above 10 000 mg / m3. Conclusion The chlorine dioxide disinfectant shows a good bactericidal effect on the vegetatwe bacteria and fungus,and it is an actual non - toxic substance in inhalation toxicity test.
Key words chlorine dioxide ;air disinfection ; germicidal e[Jicacy ; toxicity
二氧化氯是一种强氧化性消毒剂，具有杀菌、杀菌快、药用浓度低、残留量少和对环境污染少等优点，因而近年来广泛应用于水体消毒以及医疗卫生行业。应用二氧化氯进行熏蒸消毒也是一种常用方法，随着二氧化氯不断应用和深入研究，二氧化氯熏蒸消毒产品也在不断研发，但其消毒效果及安全性方面研究尚在起步阶段。本次研究的二氧化氯消毒剂为二元包装制剂，通过试验对其杀菌功效及毒性进行了观察。
1材料与方法
1.1试验材料
试验用二氧化氯消毒剂为AB二元包装，国内产品。使用时取B剂5ml倒人容器内，再投入A剂1片，即配制完成。试验菌为大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)和白色念珠菌(ATC(10231)，均由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供。所用培养基为胰蛋白胨大豆琼脂培养基（白色念珠菌用沙堡诺培养基），稀释液为胰蛋白胨生理盐水(TPS)，灭菌后备用。
试验动物包括SPF级昆明种小鼠，由山西医利大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXB（晋）2015-0001号；山西省疾病预防控制中心动物实验室许可证号：SYXK(晋)2015-0002。
1.2试验方法
1.2.1菌悬液制备取各试验菌分离培养的典型菌落，接种于各菌株专用的琼脂培养基斜面，在适宜温度培养24h。将各菌斜面新鲜培养物用无菌TPS洗脱，并稀释成1×l08~5×l08cfu/ml浓度的菌液。试验时将菌悬液与30g/L小牛血清白蛋白溶液作对倍稀释，配制成试验用菌悬液。
1.2.2中和剂鉴定试验选择大肠杆菌和白色念珠菌为指示菌，采用悬液定量法，试验在20℃水浴中进行，消毒剂二氧化氯含量为100mg/L，中和剂为1.0%硫代硫酸钠+1.0%吐温80PBS，作用时间为1min，中和时间为10min。第1组、第2组均无试验菌生长；降低消毒剂浓度为25mg/L，中和剂为1.0%硫代硫酸钠+1.0010吐温80PBS，作用时间为5min,中和时间为10min。第1组消毒液4ml+菌悬液1ml;第2组（消毒液4ml+菌悬液lml）取0.5ml+中和剂4.5ml;第3组中和剂4.5ml+（菌悬液0.1ml+硬水0.4ml）；第4组（消毒液0.4ml+中和剂4.5ml）+菌悬液0.1ml;第5组稀释液4.5ml+（菌悬液0.1ml+硬水0.4ml）；第6组稀释液+中和剂+培养基。经3次试验表明，在(20+1)oC水浴条件下，当消毒剂二氧化氯含量为100mg/L作用时间为1min时，第1组、第2组均无试验菌生长，第3、4、5组组间菌落数误差率为7.72%；降低二氧化氯含量为25m~L，中和剂为1.0%硫代硫酸钠+1.0%吐温80PBS，作用时间为5min，第1组平均生长菌落数为0cfu/ml，第2组平均生长菌落数为1050cfu/ml，第3、4、5组组间菌落误差率为7.14%。
1.2.3悬液定量杀菌试验试验
在20℃水浴锅内进行。试验时将4ml消毒剂加入1ml菌悬液作用7.5min。取0.5ml接种于4.5ml中和剂试管中，中和10min，取1.0ml接种于平皿，倾注琼脂。放人370C孵箱中培养48h，记录菌落数，计算杀灭对数值。每个试验重复3次。
1.2.4空气现场消毒试验
采用平板沉降法‘5]，选择15IT12无人房间一间，试验前开窗通风半小时，然后关闭门窗；试验时记录室内温度和相对湿度。在消毒前进行对照组采样，在15㎡房间对角线布放3块普通琼脂平板，于地面80cm高度，暴露15min采样二然后进行消毒处理，取B剂150ml倒入容器内，再投入A剂15片，密闭泡腾挥发有效氯进行熏蒸消毒2h，用AKBT-CL02分析仪每5min测定该房间内的二氧化氯浓度，然后按对照组方法进行采样，将-样平板置37cC培养48h，观察并记录菌落数，计算空气中自然菌消除率。试验重复3欢。
1.2.5急性经口毒性试验采用霍恩氏法，设1000、2】50、4640和10000mg/（kg．bw）等四组，每组5只，体重为18~22g小鼠；上述各剂量均按20ml/(kg．bw)体积灌胃，试验前小鼠禁禁食过夜的14h，一次经口灌胃给受试物二染毒后观察动物的一般状况，中毒症状和死亡情况观察期为2周1.2.6急性吸人毒性试验采用静式染毒法。染毒柜容积为0.6m3，将20只小鼠放人染毒柜中。取受试物约9g，置于超声雾化器中，放入染毒柜内，雾化密闭2h，期间用电风扇混匀柜内空气。雾化后取受试物称余重，计算受试物挥发量及浓度。染毒后观察动物的一般表现、中毒症状和死亡情况。观察期为2周。
1.2.7皮肤刺激试验采用完整皮肤刺激试验方法。试验前1d，将家兔靠前肢处脊柱两侧脱毛，范围为3cm×3cm。用滴管取受试物0.5ml轻轻涂抹于2.Scm×2.Scm大小右侧脱毛区，左侧滴蒸馏水为空白对照，然后两侧脱毛区用四层纱布敷贴，再用一层无刺激塑料膜覆盖，较后用无刺激胶布固定。作用时间为4h。试验结束后，用温水除去残留受试物分别于去除受试物后的lh、24h、48h观察皮肤局部反应．进行皮肤刺激刺激反应评分及强度判定。
2结果
2.1中和剂鉴定试验
试验结果表明，用10g/L硫代硫酸钠+10g/L吐温80PBS作为中和剂，可有效中和较高试验浓度的二氧化氯对大肠杆菌和白色念珠菌的残留作用，中和剂及中间产物对试验菌无抑制及杀灭作用，符合试验要求（表1）。
2.2悬液定量杀菌试验
试验结果表明，用浓度为100mg/L该二氧化氯消毒液对悬液内大肠杆菌作用和金黄色葡萄球菌作用7.5m/n.各次杀灭对数值均>5.00；对白色念珠菌作用7.5min，各次杀灭对数值均>4.00（表2）：
表2二氧化氯消毒剂杀菌试验结果
二．3空气现场消毒试验结果
结果表明，在室温条件下，相对湿度为50%，以300mg/m3浓度的二氧化氯密闭熏蒸作用120min，对室内空气中自然菌平均消亡率为93.17%（消毒前平均菌数为l706cfu/m3，消毒后存活菌数为117cfu/m3），结果见表3。
表3二氧化氯室内空气现场消毒试验结果
二．二急性经口毒性试验结果
试验结果表明，该二氧化氯消毒剂经胃染毒后1日内.10000mg/(kg．bw)染毒剂量组动物全部死亡；4640mg/(kg．bw)剂量组有4只动物死亡，2150mg/(kg．bw)及以下剂量组动物出现静卧中毒症状，次日症状消失。经对死亡动物解剖观察，除胃粘膜充血，变薄，胃内充满红褐色液体，其余脏器未见异常。经计算得到二氧化氯对小鼠急性经口毒性LDso为3690mg/(kg．bw)，属低毒级物质（表4）。
2.5急性吸入毒性试验试验结果
结果表明，各剂量组染毒后14d的观察期内，未见动物出现明显中毒症状；各项体征正常，无一动物死亡，该受试物对雌雄小鼠急性吸人LCso均大于10000mg/m’。
2.6皮肤刺激试验
试验结果表明，在各观察时间未见动物皮肤红斑，水肿，每只动物在1、24和48h各时间点平均积分为0，属无刺激性物质。
3讨论
该二氧化氯消毒剂的主要成份为亚氯酸钠，通过与活化剂发生反应能产生游离二氧化氯起到杀菌效果。市售含氯消毒剂由于生产原料和工艺的差异，生产的此类消毒剂消毒效果各有不同。目前认为二氧化氯消毒剂为一种强氧化剂，氧化能力约为氯气的2.5倍，具有很好的消毒作用。本实验研究也证明了二氧化氯是一种、和低毒的消毒剂，但是作为熏蒸剂进行消毒并不多见，目前常用于环境。目前熏蒸消毒剂主要有溴化甲烷、硫酰氟、磷化铝和虫菌畏等，消毒杀虫效果明显，但其毒性作用较大。研究结果表明，100mg/L二氧化氯对悬液内大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌。作用7.5min杀灭率可达到消毒合格指标，经空气现场消毒试验也证明该二氧化氯消毒剂在实际消毒应用中效果良好，自然菌消除率平均达93.17%，符合消毒标准要求。该消毒液对小鼠急性经口毒性试验结果为LDso为3690mg/(kg．bw)，属低毒级物质；急性吸人毒性试验结果为LCso>1000010000mg/m3，属于实际级物质；对家兔完整皮肤刺激强度属无刺激性。表明该二氧化氯消毒剂毒性均在安全范围内。该物质作为一种二氧化氯消毒剂是值得实际推广应用的。
参考文献
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（本文责编：何俊美收稿日期：2017-03-30）
